FISH-диагностика бластомеров (3й день развития эмбрионов)

Флюоресцентная in situ гибридизация, или FISH — один из первых методов преимплантационного скрининга эмбрионов на наличие хромосомных патологий. С появлением методов полногеномного анализа (aCGH и NGS) этот метод хоть и уходит на второй план, однако по-прежнему остаётся востребованным, в том числе и в нашей клинике.

Анализ методом FISH выполняется на третий день после оплодотворения, когда весь эмбрион состоит из 6–10 одинаковых клеток — бластомеров. Один бластомер отделяют от остальных и фиксируют на предметном стекле. Далее на ядре этого бластомера проводят исследование путём нанесения флюоресцентных меток (зондов) к различным хромосомам. В микроскоп можно видеть количество и расположение этих участков хромосом в клеточном ядре.

Стандартное исследование включает анализ числа копий хромосом X, Y и 21. При наличии у одного из будущих родителей диагностированной хромосомной перестройки выполняется развёрнутое исследование на хромосомы, вовлечённые в перестройку, а также на хромосомы, связанные с самыми распространёнными нарушениями развития плода (13, 14, 15, 16, 18, 21, 22, X, Y). При этом подбор зондов осуществляется индивидуально для каждой пары, поэтому перед началом диагностики таким пациентам необходимо заранее сдать кровь (см. Кариотипирование пациентов) для подбора зондов. Генетики нашей клиники готовят препараты клеток крови и проводят предварительную реакцию FISH на этих препаратах, чтобы выяснить, какая комбинация зондов наиболее эффективно выявляет данную перестройку. В случае, если нужные зонды в лаборатории отсутствуют, их можно заказать для проведения исследования.

Нужно понимать, что FISH-диагностика хромосомных перестроек (как, впрочем, и большинство методов полногеномного анализа) не позволяет различить нормальный кариотип и кариотип со сбалансированной перестройкой. Иными словами, преимплантационное тестирование позволяет лишь исключить перенос несбалансированного, патологичного эмбриона. Однако в случае переноса эмбриона со сбалансированной перестройкой ребёнок хотя и родится без хромосомной аномалии, но в будущем может столкнуться с той же проблемой, что и его родители. Единственный доступный нам способ определить структуру хромосом будущего ребёнка (и, соответственно, наличие или отсутствие сбалансированной перестройки) — это пренатальное кариотипирование уже во время беременности.

Метод FISH имеет серьёзные технические ограничения. До переноса эмбриона на пятый день развития можно проанализировать не более 10-11 хромосом, при этом определяется только их количество, но не структура. Кроме того, считается, что процедура биопсии бластомера на третий день более травматична для эмбриона, чем биопсия трофэктодермы на пятый день. Тем не менее, FISH имеет и ряд преимуществ:

• Биопсия бластомера на третий день возможна для любого жизнеспособного эмбриона, тогда как на пятый день не все они могут достичь необходимой стадии развития для проведения aCGH.
• FISH более доступен финансово, поскольку цена анализа не зависит от количества эмбрионов; если пациенты хотят провести анализ всего на несколько хромосом (например, на хромосомы 21, X и Y), то нет необходимости делать aCGH.
• Традиционно основным преимуществом FISH считалось то, что этот анализ проводится без заморозки эмбрионов (в «свежем» цикле) и позволяет перенести выбранный эмбрион уже на пятый день развития без дополнительных расходов на криоконсервацию. Это особенно актуально для иногородних пациентов, которым не придётся повторно приезжать для переноса эмбриона, а также для пациентов, которые психологически не готовы откладывать перенос эмбриона. Однако в клинике «Скандинавия АВА-ПЕТЕР» скрининг методом aCGH можно также выполнить в «свежем» цикле без заморозки.